Kombinált fiziológiai-morfológiai módszerek

A sejtek biocytinnel történő jelölése a fiziológiai mérések során

A whole-cell patch-clamp technika alkalmazásával fontos információkat kapunk a sejt működéséről, de nem tudunk meg semmit sem a neuron morfológiai megjelenéséről, méretéről, alakjáról. Ha a fiziológiai mérések során a sejteket biocytinnel töltjük fel, lehetővé válik későbbi morfológiai tanulmányozásuk is.

A biocytint a patch-elektród megtöltésére használt intracelluláris oldathoz adjuk hozzá 0.1% (m/m) koncentrációban. 10-15 perc elegendő ahhoz, hogy a sejt megfelelő mértékben jelölődjön. A neurofiziológiai kísérlet befejezése után a gerincvelőszeletet 4%-os paraformaldehidben néhány napon át fixáljuk. A meglehetősen vastag szeletekből vibratómmal 50µm-es metszeteket készítünk, majd elvégezzük rajtuk az immunhisztokémiai reakciókat. Fluoreszcens festékkel konjugált streptavidinnel tesszük láthatóvá a patch-clamp kísérletben vizsgált sejtet, és egyidejűleg további 2-3 antitest alkalmazására is lehetőség nyílik.

Összességében tehát a biocytin a kulcsmolekula, mely lehetővé teszi a fiziológiai szempontból megvizsgált sejt későbbi morfológiai jellegű tanulmányozását is.