{"id":537,"date":"2013-09-04T17:48:53","date_gmt":"2013-09-04T15:06:07","guid":{"rendered":"http:\/\/semmelweis-egyetem.hu\/immun-patofiziologia\/?page_id=537"},"modified":"2026-01-23T16:46:32","modified_gmt":"2026-01-23T15:46:32","slug":"metodikak","status":"publish","type":"page","link":"https:\/\/semmelweis.hu\/immun-patofiziologia\/metodikak\/","title":{"rendered":"Metodik\u00e1k"},"content":{"rendered":"

A laborunkban alkalmazott metodik\u00e1k:<\/h2>\n
\n
In vivo<\/a><\/span><\/p>\n
\n

Az \u00e1ltalunk haszn\u00e1lt eg\u00e9r modellek:<\/strong><\/span>
\n\u2022 eml\u0151r\u00e1k isograft (4T1 sejt\/Balb\/C eg\u00e9r)
\n\u2022 iszk\u00e9mia-reperf\u00fazi\u00f3 induk\u00e1lta vesefibr\u00f3zis (NMRI outbread eg\u00e9r)<\/p>\n

Seb\u00e9szeti \u00e9s k\u00e9miai modellek:<\/strong><\/span>
\nEndotoxin-ischemia kereszt-tolerancia eg\u00e9rmodell<\/strong><\/em>: N\u00f6vekv\u0151 d\u00f3zis\u00fa endotoxinnal kialak\u00edtott rezisztencia.
\nEndotoxin sokk eg\u00e9rmodell<\/strong><\/em>: Gramm negat\u00edv bakt\u00e9riumok lipopoliszacharidj\u00e1nak bejuttat\u00e1sa endotoxin sokk kiv\u00e1lt\u00e1s\u00e1nak c\u00e9lj\u00e1b\u00f3l.
\nDiabeteses \u00e1llatmodell<\/strong><\/em>: Az 1-es t\u00edpus\u00fa diabetes mellitus modellez\u00e9se Streptozotocinnal induk\u00e1lt inzulin-hi\u00e1ny modell patk\u00e1nyokon \u00e9s egereken.
\nSzerv\u00e1t\u00fcltet\u00e9s<\/strong><\/em>: Ortotr\u00f3p vese-transzplant\u00e1ci\u00f3 patk\u00e1nyban.
\nSubtotalis nefrekt\u00f3mia<\/strong><\/em>: Kr\u00f3nikus vesefibr\u00f3zis modell: A teljes jobb vese es a bal vese 2\/3-\u00e1nak elt\u00e1vol\u00edt\u00e1s\u00e1val a vesek\u00e9reg 5\/6-\u00e1t rezek\u00e1ljuk.
\nIschemia-reperf\u00fazi\u00f3<\/strong><\/em>: A bal ves\u00e9t az art\u00e9ria es v\u00e9na renalis leszor\u00edt\u00e1s\u00e1val kirekesztj\u00fck a kering\u00e9sb\u0151l. A jobb oldali ves\u00e9t kontroll c\u00e9lb\u00f3l elt\u00e1vol\u00edtjuk (eg\u00e9r \u00e9s patk\u00e1ny modell).
\nVesev\u00e9na \u00e9s port\u00e1lis injekt\u00e1l\u00e1s<\/strong><\/em>: Vesetubulus \u00e9s m\u00e1jsejtek transzfekci\u00f3j\u00e1nak c\u00e9lj\u00e1b\u00f3l nagyvolumen\u0171 oldatok bead\u00e1sa az adott szerv v\u00e9n\u00e1j\u00e1ba.
\nHydrodynamikus kezel\u00e9s<\/strong><\/em>: A kering\u0151 v\u00e9rt\u00e9rfogat min. 50%-\u00e1nak megfelel\u0151 volumen injekt\u00e1l\u00e1sa az egyik farokv\u00e9n\u00e1ba, kevesebb mint 10 ms alatt, a has\u0171ri nagy v\u00e9rell\u00e1t\u00e1s\u00fa parenchym\u00e1s szervek (m\u00e1j, vese) transzform\u00e1l\u00e1sa c\u00e9lj\u00e1b\u00f3l.<\/p>\n

Funkcion\u00e1lis m\u00e9r\u00e9sek:<\/strong><\/span>
\nDiur\u00e9zis ketrec<\/strong><\/em>: Huszonn\u00e9gy \u00f3r\u00e1s vizeletgy\u0171jt\u00e9s, proteinuria, albuminuria meghat\u00e1roz\u00e1s\u00e1ra.<\/p>\n

Glomerul\u00e1ris k\u00e1rosod\u00e1s vizsg\u00e1latok:<\/strong><\/span>
\nAlbuminuria<\/strong><\/em>: A vizelet albumin szintj\u00e9nek meghat\u00e1roz\u00e1sa ELISA m\u00f3dszerrel.
\nVizelet \u00f6sszfeh\u00e9rje<\/strong><\/em>: Gy\u0171jt\u00f6tt vizelet \u00f6sszfeh\u00e9rje meghat\u00e1roz\u00e1sa \u00e9s t\u00f6meg szerinti sz\u00e9tv\u00e1laszt\u00e1sa SDS-Page gelen, majd ki\u00e9rt\u00e9kel\u00e9s denzitometri\u00e1s m\u00f3dszerrel.
\nInulin, PAH, mannitol clearance<\/strong><\/em>: Filtr\u00e1ci\u00f3s vesefunkci\u00f3 vizsg\u00e1latok a glomerul\u00e1ris filtr\u00e1ci\u00f3 (GFR) \u00e9s a ves\u00e9n 1 perc alatt \u00e1t\u00e1raml\u00f3 plazmamennyis\u00e9g (RPF) meghat\u00e1roz\u00e1s\u00e1ra.
\nCREA\/UREA: V\u00e9r illetve vizelet kreatin \u00e9s urea szint meghat\u00e1roz\u00e1s Reflotron tesztcs\u00edk automat\u00e1val (Roche).<\/p>\n

Tubul\u00e1ris k\u00e1rosod\u00e1sok vizsg\u00e1latok:<\/strong><\/span>
\nNGAL<\/strong><\/em>: Vizelet NGAL szint (neutrophil gelatinase associated lipocalin) meghat\u00e1roz\u00e1sa ELISA m\u00f3dszerrel.
\nGamma-GT\/CREA<\/strong><\/em>: Vizelet kreatinin \u00e9s gamma-GT meghat\u00e1roz\u00e1sa vizeletb\u0151l Reflotron tesztcs\u00edk alkalmaz\u00e1s\u00e1val (Roche).
\nMikroproteuinuria<\/strong><\/em>: SDS-Page elektrofor\u00e9zissel denzitometri\u00e1s elj\u00e1r\u00e1ssal vizsg\u00e1lhat\u00f3ak a vizeletben megjelen\u0151 alacsony molekul\u00e1ris t\u00f6meg\u0171 feh\u00e9rj\u00e9k mennyis\u00e9ge.
\nErek funkcion\u00e1lis vizsg\u00e1latai:
\nV\u00e9rnyom\u00e1s m\u00e9r\u00e9s<\/strong><\/em>: Telemetri\u00e1s \u00e9s IITC (piezoelektromos) farok-v\u00e9rnyom\u00e1s m\u00e9r\u00e9s.<\/p>\n

Gl\u00fck\u00f3z h\u00e1ztart\u00e1s funkcion\u00e1lis k\u00f6vet\u00e9se:<\/strong><\/span>
\nSz\u00e9rum gluk\u00f3z<\/strong><\/em>: Sz\u00e9rum gl\u00fck\u00f3z szint m\u00e9r\u00e9se Reflotron tesztcs\u00edk automat\u00e1val (Roche).
\nOGTT<\/strong><\/em>: Or\u00e1lisan beadott gl\u00fck\u00f3z sor\u00e1n megn\u00f6vekv\u0151 v\u00e9rcukorszint cs\u00f6kken\u00e9se az eltelt id\u0151 f\u00fcggv\u00e9ny\u00e9ben.
\nFrukt\u00f3zamin<\/strong><\/em>: Sz\u00e9rumban tal\u00e1lhat\u00f3 glik\u00e1lt feh\u00e9rje kvantitat\u00edv tesztje.
\nM\u00e1jfunkci\u00f3 vizsg\u00e1latok<\/strong><\/em>: Sz\u00e9rum GGT\/ALAT (GOT)\/ASAT (GPT)\/ALP\/TG\/CHOL szintjeinek meghat\u00e1roz\u00e1s Reflotron tesztcs\u00edk automat\u00e1val (Roche).<\/p>\n<\/div>\n<\/div>\n<\/div>\n

\n
Ex vivo<\/a><\/span><\/p>\n
\n

Szuperoxid-anion kimutat\u00e1s<\/strong><\/em>: Sz\u00f6vet minta dihidroetidin fest\u00e9se majd az egyes sz\u00f6vetr\u00e9tegek 3D elemz\u00e9se \u00e9s a szuperoxid termel\u00e9s detekt\u00e1l\u00e1sa konfok\u00e1lis mikroszk\u00f3ppal.
\nAorta funkci\u00f3 m\u00e9r\u00e9s<\/strong><\/em>: Eg\u00e9rb\u0151l prepar\u00e1lt aort\u00e1n az endothel funkci\u00f3 vizsg\u00e1lata, ismert hat\u00e1s\u00fa farmakonokkal l\u00e9trehozott kontrakci\u00f3 \u00e9s relax\u00e1ci\u00f3 m\u00e9r\u00e9se szervkamr\u00e1ban.
\nMikro\u00e9r funkci\u00f3 m\u00e9r\u00e9s<\/em><\/strong>: Izol\u00e1lt rezisztencia-\u00e9r ismert hat\u00e1s\u00fa farmakonokra adott v\u00e1laszainak vizsg\u00e1lata szervkamr\u00e1ban.<\/p>\n

\n
\n<\/div>\n<\/div>\n<\/div>\n

\n
In vitro<\/a><\/span><\/p>\n
\n

Molekul\u00e1ris biol\u00f3gia:<\/strong><\/span>
\nAlapvet\u0151 molekul\u00e1ris biol\u00f3giai metodik\u00e1k<\/strong><\/em>: PCR, Northern blot, enzimatikus em\u00e9szt\u00e9s, DNS\/RNS izol\u00e1l\u00e1sa sz\u00f6vetb\u0151l ill. sejtb\u0151l, primer tervez\u00e9s
\nGenotipiz\u00e1l\u00e1s<\/strong><\/em>: A szapor\u00edtott k\u00eds\u00e9rleti \u00e1llatok genot\u00edpus\u00e1nak meghat\u00e1roz\u00e1sa.
\nRT-PCR<\/strong><\/em>: Izol\u00e1lt RNS minta mRNS szintj\u00e9nek kvantitat\u00edv meghat\u00e1roz\u00e1sa a g\u00e9nexpresszi\u00f3 szint meghat\u00e1roz\u00e1s\u00e1nak c\u00e9lj\u00e1b\u00f3l.<\/p>\n

siRNS:<\/strong><\/span>
\nElektropor\u00e1l\u00e1s<\/strong><\/em>: Az siRNS-t sejtekbe juttatva figyelj\u00fck annak hat\u00e1s\u00e1t a g\u00e9nexpresszi\u00f3ra.
\nHidrodinamikus kezel\u00e9s<\/strong><\/em>: Az egerek farokv\u00e9n\u00e1j\u00e1ba injekt\u00e1lva vizsg\u00e1ljuk az siRNS \u00e9lettani hat\u00e1sait.<\/p>\n

Komplement rendszer:<\/strong><\/span>
\nKomplement aktiv\u00e1ci\u00f3 \u00e9s inhib\u00edci\u00f3<\/strong><\/em>: Sz\u00e9rum komplement rendszer funkcion\u00e1lis \u00e9s mennyis\u00e9gi vizsg\u00e1lata ELISA m\u00f3dszerrel.<\/p>\n

Feh\u00e9rje expresszi\u00f3<\/strong>:<\/span>
\nSejt vagy sz\u00f6vet liz\u00e1tummal dolgozva vizsg\u00e1ljuk a feh\u00e9rj\u00e9k esetleges expresszi\u00f3s szint v\u00e1ltoz\u00e1s\u00e1t els\u0151sorban Western Blot technik\u00e1val vagy ELISA metodik\u00e1val.<\/p>\n

Sejtkult\u00fara:<\/strong><\/span>
\nPrim\u00e9r sejtkult\u00fara<\/strong><\/em>: HUVEC (Human Umbilical Vein Endothelial Cells) prim\u00e9r sejtvonallal dolgozunk, mellyet k\u00f6ld\u00f6kzsin\u00f3rb\u00f3l izol\u00e1lunk.
\nFlow cytometria<\/strong><\/em>: \u00c1raml\u00e1si citometriai elj\u00e1r\u00e1sok sejt-t\u00edpus meghat\u00e1roz\u00e1s\u00e1ra felsz\u00edni markerek seg\u00edts\u00e9g\u00e9vel.
\nV\u00e9rsejtek izol\u00e1l\u00e1sa<\/strong><\/em>: V\u00f6r\u00f6sv\u00e9rsejt, granulocyta, lymphocyta izol\u00e1l\u00e1sa teljes v\u00e9rb\u0151l.
\nLymphocyta aktiv\u00e1ci\u00f3<\/strong><\/em>: V\u00e9rb\u0151l izol\u00e1lt lymmphocyt\u00e1kat aktiv\u00e1l\u00f3 szerrel (PMA, ionomicyn) aktiv\u00e1ljuk, majd a fel\u00fasz\u00f3b\u00f3l ELISA-val meghat\u00e1rozzuk a termelt citokin-koncentr\u00e1ci\u00f3t.
\nOGD endothel sejteken<\/strong><\/em>: Oxig\u00e9n \u00e9s gl\u00fck\u00f3z megvon\u00e1s hat\u00e1sa a szuperoxid termel\u00e9sre HUVEC sejteken (dihidroetidin fest\u00e9s, Life-Death kit konfok\u00e1lis mikroszk\u00f3p).<\/p>\n

\nPatol\u00f3gia:<\/strong><\/span>
\nSz\u00edv \u00e9s aorta morfol\u00f3gia<\/strong><\/em>: Eg\u00e9rb\u0151l prepar\u00e1lt sz\u00edvizom strukt\u00far\u00e1j\u00e1nak vizsg\u00e1lata f\u00e9lv\u00e9kony metszeteken pontsz\u00e1mol\u00e1sos szterol\u00f3gia m\u00f3dszerrel. Eg\u00e9r aort\u00e1b\u00f3l k\u00e9sz\u00fclt metszeteken az intima megvastagod\u00e1s digit\u00e1lis m\u00e9r\u00e9se.
\nSzervperf\u00fazi\u00f3<\/strong><\/em>: A k\u00eds\u00e9rleti \u00e1llat szerveinek \u00e1tmos\u00e1sa,hisztol\u00f3giai \u00e9s molekul\u00e1ris biol\u00f3giai mint\u00e1k nyer\u00e9s\u00e9nek c\u00e9lj\u00e1b\u00f3l.
\nStandard hisztok\u00e9miai fest\u00e9sek<\/strong><\/em>: Paraffinba \u00e1gyazott metszetek fest\u00e9se (PAS, hematoxillin-eosin, Trikr\u00f3m, Sudan IV, Masson, Oil red O stb.).
\nImmunhisztol\u00f3gia<\/strong><\/em>: C3, fibrotikus markerek (collagen, fibronectin), valamint TGF-b\u00e9ta kimutat\u00e1sa metszeteken immunhisztol\u00f3giai elj\u00e1r\u00e1sokkal.<\/p>\n<\/div>\n<\/div>\n<\/div>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"

A laborunkban alkalmazott metodik\u00e1k: In vivo<\/a> Az \u00e1ltalunk haszn\u00e1lt eg\u00e9r modellek: \u2022 eml\u0151r\u00e1k isograft (4T1 sejt\/Balb\/C eg\u00e9r) \u2022 iszk\u00e9mia-reperf\u00fazi\u00f3 induk\u00e1lta vesefibr\u00f3zis (NMRI outbread eg\u00e9r) Seb\u00e9szeti \u00e9s k\u00e9miai modellek: Endotoxin-ischemia kereszt-tolerancia eg\u00e9rmodell: N\u00f6vekv\u0151 d\u00f3zis\u00fa endotoxinnal kialak\u00edtott rezisztencia. Endotoxin sokk eg\u00e9rmodell: Gramm negat\u00edv bakt\u00e9riumok lipopoliszacharidj\u00e1nak bejuttat\u00e1sa endotoxin sokk kiv\u00e1lt\u00e1s\u00e1nak c\u00e9lj\u00e1b\u00f3l. Diabeteses \u00e1llatmodell: Az 1-es t\u00edpus\u00fa diabetes mellitus modellez\u00e9se Streptozotocinnal …<\/p>\n","protected":false},"author":162,"featured_media":0,"parent":0,"menu_order":3,"comment_status":"closed","ping_status":"open","template":"","meta":{"_acf_changed":false,"footnotes":""},"categories":[],"tags":[],"class_list":["post-537","page","type-page","status-publish","hentry"],"acf":[],"_links":{"self":[{"href":"https:\/\/semmelweis.hu\/immun-patofiziologia\/wp-json\/wp\/v2\/pages\/537","targetHints":{"allow":["GET"]}}],"collection":[{"href":"https:\/\/semmelweis.hu\/immun-patofiziologia\/wp-json\/wp\/v2\/pages"}],"about":[{"href":"https:\/\/semmelweis.hu\/immun-patofiziologia\/wp-json\/wp\/v2\/types\/page"}],"author":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/semmelweis.hu\/immun-patofiziologia\/wp-json\/wp\/v2\/users\/162"}],"replies":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/semmelweis.hu\/immun-patofiziologia\/wp-json\/wp\/v2\/comments?post=537"}],"version-history":[{"count":10,"href":"https:\/\/semmelweis.hu\/immun-patofiziologia\/wp-json\/wp\/v2\/pages\/537\/revisions"}],"predecessor-version":[{"id":2408,"href":"https:\/\/semmelweis.hu\/immun-patofiziologia\/wp-json\/wp\/v2\/pages\/537\/revisions\/2408"}],"wp:attachment":[{"href":"https:\/\/semmelweis.hu\/immun-patofiziologia\/wp-json\/wp\/v2\/media?parent=537"}],"wp:term":[{"taxonomy":"category","embeddable":true,"href":"https:\/\/semmelweis.hu\/immun-patofiziologia\/wp-json\/wp\/v2\/categories?post=537"},{"taxonomy":"post_tag","embeddable":true,"href":"https:\/\/semmelweis.hu\/immun-patofiziologia\/wp-json\/wp\/v2\/tags?post=537"}],"curies":[{"name":"wp","href":"https:\/\/api.w.org\/{rel}","templated":true}]}}