{"id":549,"date":"2026-08-19T08:58:07","date_gmt":"2026-08-19T06:58:07","guid":{"rendered":"https:\/\/semmelweis.hu\/gsi\/?page_id=549"},"modified":"2026-08-24T17:04:58","modified_gmt":"2026-08-24T15:04:58","slug":"nvkp_16-1-2016-0017","status":"publish","type":"page","link":"https:\/\/semmelweis.hu\/gsi\/rolunk\/palyazatok\/nvkp_16-1-2016-0017\/","title":{"rendered":"NVKP_16-1-2016-0017 (2017-2019)"},"content":{"rendered":"

Id\u0151tartam: 2017.12.01 – 2019.12.01<\/em><\/p>\n

\"\"<\/a> \"\"<\/a><\/p>\n

\u00a0<\/h2>\n

\u00a0<\/h2>\n

\u00a0<\/h2>\n

Kutat\u00e1si ter\u00fclet<\/h2>\n

Extracellul\u00e1ris vezikul\u00e1k szerepe a kardiovaszkul\u00e1ris megbeteged\u00e9sekben<\/p>\n

A Nemzeti Sz\u00edvprogram keret\u00e9n bel\u00fcl kit\u0171z\u00f6tt kutat\u00e1sfejleszt\u00e9si c\u00e9lok<\/h2>\n

A hum\u00e1n pericardi\u00e1lis folyad\u00e9k sejtes \u00f6sszet\u00e9tel\u00e9nek, extracellul\u00e1risvezikul\u00e1inak \u00e9s sejtek k\u00f6z\u00f6tti kommunik\u00e1ci\u00f3j\u00e1nak vizsg\u00e1lata sz\u00edv\u00e1t\u00fcltet\u00e9s sor\u00e1n elt\u00e1vol\u00edtott donor \u00e9s recipiens, valamint coronaria bypass m\u0171t\u00e9ten \u00e1tesett betegek eset\u00e9ben multiomikai megk\u00f6zel\u00edt\u00e9ssel.<\/p>\n

A lipoproteineknekextracellul\u00e1risvezikul\u00e1kkal t\u00f6rt\u00e9n\u0151, els\u0151k\u00e9nt kutat\u00f3csoportunk \u00e1ltal le\u00edrt asszoci\u00e1ci\u00f3j\u00e1nak a vizsg\u00e1lata. A lipoprotein-extracellul\u00e1risvezikula komplexek hat\u00e1s\u00e1nak vizsg\u00e1lata a sejtek \u00e1ltali felv\u00e9telre, a \u201ehabos sejt\u201d \u00e1talakul\u00e1sra \u00e9s a m\u00e1j \u00e1ltali elimin\u00e1ci\u00f3ra in vitro \u00e9s eg\u00e9rmodellekben.<\/p>\n

Hum\u00e1n \u00e9s eg\u00e9r sz\u00edvizomsejt eredet\u0171 extracellul\u00e1risvezikul\u00e1k vizsg\u00e1lata multiomikai m\u00f3dszerekkel, sz\u00edvizomsejt eredet\u0171 extracellul\u00e1risvezikula markerek azonos\u00edt\u00e1sa \u00e9s valid\u00e1l\u00e1saischemi\u00e1s sz\u00edvbetegs\u00e9gben szenved\u0151 betegek v\u00e9rplazm\u00e1j\u00e1nak \u00e1raml\u00e1si citometri\u00e1s elemz\u00e9s\u00e9vel. Extracellul\u00e1risvezikula alap\u00fa diagnosztikus panel l\u00e9trehoz\u00e1sa.<\/p>\n

A Nemzeti Sz\u00edvprogram p\u00e1ly\u00e1zati keret\u00e9b\u0151l beszerzett infrastrukt\u00fara<\/h2>\n
\u00c1raml\u00e1si citom\u00e9ter \u00e9s szorter<\/a><\/p>\n
\n

Int\u00e9zet\u00fcnkben 2018. j\u00fanius \u00f3ta \u00fczemel a Sony LE-SH800SFP kolline\u00e1ris \u00e1raml\u00e1si citom\u00e9ter \u00e9s szorter. A k\u00e9sz\u00fcl\u00e9k kompakt m\u00e9ret\u0171 (55 cm x 55 cm x 72 cm), m\u0171szeregys\u00e9ge elf\u00e9r egy laborat\u00f3riumi asztalon, fluidikai egys\u00e9gei pedig az asztal alatt. 7. emeleti 708. \u201eNagy\u201d laborat\u00f3riumunkban helyezt\u00fck el egy rezg\u00e9smentes asztalon. A k\u00e9sz\u00fcl\u00e9k bekapcsol\u00e1sa, az \u00e1raml\u00e1si \u00e9s az optikai rendszerek optimaliz\u00e1l\u00e1sa teljesen automatikusan, beavatkoz\u00e1s-mentesen t\u00f6rt\u00e9nik. A k\u00e9sz\u00fcl\u00e9k ehhez szintetikus gy\u00e1ri beadeket haszn\u00e1l. A be\u00e1ll\u00edt\u00e1s m\u00e1s, hasonl\u00f3 teljes\u00edtm\u00e9ny\u0171 sejtszorter k\u00e9sz\u00fcl\u00e9kek eset\u00e9ben t\u00f6bbnyire manu\u00e1lisan t\u00f6rt\u00e9nik \u00e9s id\u0151ig\u00e9nyes folyamat. Ez\u00e9rt ez a berendez\u00e9s nagyon felhaszn\u00e1l\u00f3bar\u00e1t.<\/p>\n

A Sony LE-SH800SFP szorter architekt\u00far\u00e1ja k\u00e9t szempontb\u00f3l k\u00fcl\u00f6nleges<\/h3>\n

1. Az \u00e1raml\u00e1si kamra (Flow Cell) az \u00e1raml\u00e1si citom\u00e9terek legfontosabb \u00e9s legprec\u00edzebb alkatr\u00e9sze. Ebben j\u00f6n l\u00e9tre a minta hidrodinamikus f\u00f3kusz\u00e1l\u00e1sa r\u00e9v\u00e9n a minta\u00e1ram (stream), melyben a sejtek egym\u00e1s ut\u00e1n, egyes\u00e9vel haladnak a burkol\u00f3folyad\u00e9k k\u00f6zep\u00e9n egy sz\u0171k folyad\u00e9k\u00e1ramban; tov\u00e1bb\u00e1 itt t\u00f6rt\u00e9nik a sejtek megvil\u00e1g\u00edt\u00e1sa a gerjeszt\u0151 l\u00e9zerekkel, \u00e9s a fluoreszcens emisszi\u00f3 leolvas\u00e1sa is. \u00a0Ezen k\u00edv\u00fcl a folyad\u00e9kcsepp-szorterekben az \u00e1raml\u00e1si kamra kimeneti apert\u00far\u00e1j\u00e1n keletkezik a line\u00e1ris aeroszol, melyben az egym\u00e1s ut\u00e1n rep\u00fcl\u0151 folyad\u00e9kcseppek tartalmazz\u00e1k a sejteket. Az LE-SH800SFP k\u00e9sz\u00fcl\u00e9kben az \u00e1raml\u00e1si kamra egy eldobhat\u00f3 m\u0171anyag alkatr\u00e9szben tal\u00e1lhat\u00f3, melyet Microfluidic Sorting Chipnek (r\u00f6viden Chipnek) neveznek. A k\u00e9sz\u00fcl\u00e9k ily m\u00f3don biztos\u00edtja, hogy a folyad\u00e9k\u00e1ram \u00e9s az aerosol minden bekapcsol\u00e1s alkalm\u00e1val ugyan olyan legyen, megk\u00f6nny\u00edtve ezzel a rendszer optimaliz\u00e1l\u00e1s\u00e1t \u00e9s megn\u00f6velve stabilit\u00e1s\u00e1t. Term\u00e9szetesen ez kiss\u00e9 megn\u00f6veli a m\u00e9r\u00e9senk\u00e9nti fajlagos k\u00f6lts\u00e9geket (1 chip \u00e1ra kb. 10\u00a0000Ft). A k\u00f6penyfolyad\u00e9k \u00e9s a minta injekci\u00f3ja a hagyom\u00e1nyos, nyom\u00e1svez\u00e9relt m\u00f3don t\u00f6rt\u00e9nik. A Chipek 3 f\u00e9le p\u00f3rusm\u00e9retben v\u00e1s\u00e1rolhat\u00f3k (70\u00b5m, 100\u00b5m \u00e9s 130\u00b5m) k\u00fcl\u00f6nb\u00f6z\u0151 m\u00e9ret\u0171 sejtek m\u00e9r\u00e9s\u00e9hez \u00e9s szortol\u00e1s\u00e1hoz. Eddigi tapasztalataink szerint az immunol\u00f3giai kutat\u00e1sok sor\u00e1n vizsg\u00e1lt primer sejtek (limfocit\u00e1k, monocit\u00e1k), valamint a kisebb m\u00e9ret\u0171 daganatsejt-vonalak szortol\u00e1sa t\u00f6bbnyire a 100\u00b5m-es Chipekkel v\u00e9gezhet\u0151 eredm\u00e9nyesen (a gy\u00e1rt\u00f3 aj\u00e1nl\u00e1sainak megfelel\u0151en). A 70\u00b5m-e apert\u00far\u00e1val m\u00e9g nem szerezt\u00fcnk tapasztalatot. N\u00e9h\u00e1ny k\u00eds\u00e9rletben, ahol kifejezetten nagym\u00e9ret\u0171 (melanoma malignum) sejtek sz\u00e9tv\u00e1logat\u00e1s\u00e1t kellett elv\u00e9gezni, a 130\u00b5m Chippel v\u00e9gezt\u00fck a szortol\u00e1st. Egy Chip kb. 24 \u00f3ra folyamatos szortol\u00e1sra haszn\u00e1lhat\u00f3 amennyiben a k\u00e9sz\u00fcl\u00e9k 405nm-es l\u00e9zer\u00e9t is haszn\u00e1ljuk a m\u00e9r\u00e9s sor\u00e1n (mivel a t\u00e1voli ibolyasz\u00edn\u0171 f\u00e9ny h\u00e1tr\u00e1nyosan befoly\u00e1solja a m\u0171anyag stabilit\u00e1s\u00e1t). Amennyiben csak a t\u00f6bbi l\u00e9zert haszn\u00e1ljuk, a chip hosszabb ideig is haszn\u00e1lhat\u00f3.<\/p>\n

2. Az LE-SH800SFP szorter m\u00e1sik k\u00fcl\u00f6nleges jellegzetess\u00e9ge a 4 l\u00e9zer (k\u00e9k: 488nm, s\u00e1rga-z\u00f6ld: 561nm, v\u00f6r\u00f6s: 638nm \u00e9s ibolya 405nm) kolline\u00e1ris elhelyezked\u00e9se. Ez azt jelenti, hogy a l\u00e9zerek f\u00e9nye egy\u00fctt, egy nyal\u00e1bban \u00e9ri el a folyad\u00e9k\u00e1ramban halad\u00f3 sejteket. Ennek k\u00f6vetkezt\u00e9ben a k\u00e9sz\u00fcl\u00e9k nem tud k\u00fcl\u00f6nbs\u00e9get tenni a k\u00fcl\u00f6nb\u00f6z\u0151 hull\u00e1mhossz\u00fas\u00e1g\u00fa f\u00e9nnyel gerjesztett, viszont hasonl\u00f3 tartom\u00e1nyban emitt\u00e1l\u00f3 fluoreszcens fest\u00e9kek szign\u00e1ljai k\u00f6z\u00f6tt. A k\u00fcl\u00f6nleges optikai fel\u00e9p\u00edt\u00e9s el\u0151nye, hogy nagy sebess\u00e9ggel is pontosan lehet vele m\u00e9rni. Saj\u00e1t tapasztalatain szerint probl\u00e9mamentesen lehet 10\u00a0000-11 000 sejt \/ m\u00e1sodperc sebess\u00e9ggel m\u00e9rni \u00e9s szortolni. A kolline\u00e1ris fel\u00e9p\u00edt\u00e9s h\u00e1tr\u00e1nya, hogy felt\u00e9tlen\u00fcl sz\u00fcks\u00e9ges a k\u00e9sz\u00fcl\u00e9k saj\u00e1toss\u00e1gainak figyelembe v\u00e9tele a fluoreszcens fest\u00e9k-panelek tervez\u00e9sekor. Alapvet\u0151en k\u00e9tf\u00e9le \u00fczemm\u00f3dban lehet a bekapcsolni a k\u00e9sz\u00fcl\u00e9ket, att\u00f3l f\u00fcgg\u0151en, hogy haszn\u00e1ljuk-e a 405 nm-es l\u00e9zert, vagy nem. Mindk\u00e9t esetben 6 fluoreszcens csatorna \u00e1ll rendelkez\u00e9sre, de ezek kioszt\u00e1sa k\u00fcl\u00f6nb\u00f6z\u0151. 405nm-es l\u00e9zer n\u00e9lk\u00fcl (a jellegzetes fest\u00e9kek r\u00f6vid\u00edt\u00e9s\u00e9vel) FITC, PE, PE-Texas Red, APC, Alexa Fluor 700 \u00e9s PE-Cy7 fest\u00e9kek emisszi\u00f3j\u00e1nak megfelel\u0151 csatorn\u00e1k, m\u00edg 405nm-es l\u00e9zer haszn\u00e1lat\u00e1val Pacific Blue, FITC, PE, APC, Alexa Fluor 700 \u00e9s PE-Cy7 fest\u00e9kek emisszi\u00f3j\u00e1nak megfelel\u0151 csatorn\u00e1k \u00e1llnak rendelkez\u00e9sre. Fontos megjegyezni azonban, hogy a kolline\u00e1ris fel\u00e9p\u00edt\u00e9s miatt a k\u00fcl\u00f6nb\u00f6z\u0151 l\u00e9zerek \u00e1ltal gerjesztett, de azonos tartom\u00e1nyban emitt\u00e1l\u00f3 fest\u00e9kek nem haszn\u00e1lhat\u00f3k egy\u00fctt, mert a szign\u00e1ljukat nem k\u00e9pes elk\u00fcl\u00f6n\u00edteni a g\u00e9p (szemben m\u00e1s, hagyom\u00e1nyos fel\u00e9p\u00edt\u00e9s\u0171 k\u00e9sz\u00fcl\u00e9kekkel, ahol ezeket a fest\u00e9keket k\u00fcl\u00f6nb\u00f6z\u0151 csatorn\u00e1kon detekt\u00e1lhatjuk). \u00cdgy p\u00e9ld\u00e1ul mindk\u00e9t \u00fczemm\u00f3dban ker\u00fclend\u0151 a PerCP-Cy5.5 haszn\u00e1lata, mivel mind az APC, mind az Alexa Fluor 700 szign\u00e1lj\u00e1val \u00e1tfed, illetve a PE-Cy7 \u00e9s az APC-Cy7 sem haszn\u00e1lhat\u00f3 egy\u00fctt. Hasonl\u00f3 m\u00f3don a 405nm-es l\u00e9zer haszn\u00e1lata eset\u00e9n a PE \u00e9s a Brilliant Violet 605, valamint az Alexa Fluor 700 \u00e9s a Brilliant Violet 711 emisszi\u00f3ja \u00fctk\u00f6zik.<\/p>\n

\"\"<\/a><\/p>\n

A k\u00e9sz\u00fcl\u00e9k rendelkezik fluoreszcens proteinek m\u00e9r\u00e9s\u00e9re alkalmas k\u00fcl\u00f6n sz\u0171r\u0151k\u00e9szlettel is. A szortol\u00e1s 2 cs\u0151be vagy 6-96 lyuk\u00fa mikrotiter lemezek welljeibe lehets\u00e9ges. Ez ut\u00f3bbi esetben lehet\u0151s\u00e9g van ak\u00e1r wellenk\u00e9nt 1-1 sejt szortol\u00e1s\u00e1ra is; tov\u00e1bb\u00e1 a k\u00e9sz\u00fcl\u00e9k k\u00e9pes \u00fagynevezett index\u00e1lt szortol\u00e1s v\u00e9gz\u00e9s\u00e9re, azaz r\u00f6gz\u00edteni tudja minden egyes kiszortolt sejt koordin\u00e1t\u00e1it (fluoreszcens intenzit\u00e1s \u00e9rt\u00e9keit) az \u00f6sszes vizsg\u00e1lt csatorn\u00e1ban \u00e9s a forward-, valamit backscatter (sidescatter) detektorokon. \u00cdgy az egyes sejtek kl\u00f3noz\u00e1sa sor\u00e1n visszak\u00f6vethet\u0151 a kiindul\u00e1si sejt pontos, a szortol\u00e1skor m\u00e9rt immunfenot\u00edpusa.<\/p>\n

A szorter szoftvere intuit\u00edv, k\u00f6nnyen megbirk\u00f3zik ak\u00e1r 10-20 milli\u00f3 lem\u00e9rt sejt elemz\u00e9s\u00e9vel is. Az elektronikus abort\u00e1ci\u00f3s r\u00e1ta m\u00e9g nagy sebess\u00e9g\u0171 szortol\u00e1s eset\u00e9n sem magas. A k\u00e9sz\u00fcl\u00e9k \u00e9vente egyszer ig\u00e9nyel a forgalmaz\u00f3 \u00e1ltal v\u00e9gzett nagy karbantart\u00e1st. Ezen k\u00edv\u00fcl havonta egyszer sz\u00fcks\u00e9ges a bels\u0151, \u00e9s haszn\u00e1latt\u00f3l f\u00fcgg\u0151en 3-6 havonta az \u00f6sszes folyad\u00e9kvezet\u00e9k \u00e1tmos\u00e1sa etanollal. Ilyenkor a mintafelsz\u00edv\u00f3 cs\u00f6vet is c\u00e9lszer\u0171 cser\u00e9lni.<\/p>\n

A beszerz\u00e9s \u00f3ta eltelt 31 h\u00f3napban a k\u00e9sz\u00fcl\u00e9kkel sz\u00e1mos k\u00fcl\u00f6nb\u00f6z\u0151 alkalmaz\u00e1s futtat\u00e1sa r\u00e9v\u00e9n szerezt\u00fcnk tapasztalatot. \u00c1ltal\u00e1noss\u00e1gban elmondhat\u00f3, hogy j\u00f3 \u00e9letk\u00e9pess\u00e9g\u0171 kiindul\u00e1si sejtek eset\u00e9n a kiszortolt sejtek tov\u00e1bb \u00e9lnek, sejtkult\u00far\u00e1ban szapor\u00edthat\u00f3k. A szortol\u00e1s a nagy expresszi\u00f3s k\u00fcl\u00f6nbs\u00e9get mutat\u00f3 sejtek sz\u00e9tv\u00e1logat\u00e1sa sor\u00e1n nagy tisztas\u00e1g\u00fa popul\u00e1ci\u00f3kat eredm\u00e9nyez, ami a kiszortol sejtek visszam\u00e9r\u00e9s\u00e9vel ellen\u0151rizhet\u0151. Az al\u00e1bbiakban felsorolunk n\u00e9h\u00e1nyat az eddig elv\u00e9gzett k\u00eds\u00e9rletek k\u00f6z\u00fcl:<\/p>\n

1. Nagy mennyis\u00e9g\u0171, transzfekt\u00e1lt, fluoreszcens proteineket expressz\u00e1l\u00f3 \u00e9s nem expressz\u00e1l\u00f3 sejt sz\u00e9tv\u00e1logat\u00e1sa (pl.: GFP HEK sejtek).<\/p>\n

2. Kis expresszi\u00f3s k\u00fcl\u00f6nbs\u00e9get mutat\u00f3 tumorsejtek sz\u00e9tv\u00e1laszt\u00e1sa. A k\u00eds\u00e9rlet sor\u00e1n vastagb\u00e9lr\u00e1k sejtpopul\u00e1ci\u00f3kat v\u00e1lasztottuk sz\u00e9t egy, a tumorn\u00f6veked\u00e9st el\u0151seg\u00edt\u0151 kandid\u00e1ns sejtfelsz\u00edni marker expresszi\u00f3ja alapj\u00e1n. A c\u00e9l a lehets\u00e9ges tumor\u0151ssejtek izol\u00e1l\u00e1sa volt.<\/p>\n

3. Hum\u00e1n \u00e9s eg\u00e9r regul\u00e1ci\u00f3s T (Treg) sejt alcsoportok szortol\u00e1sa v\u00e9rb\u0151l \u00e9s sz\u00f6vetekb\u0151l.<\/p>\n

4. Hum\u00e1n innate lymphoid sejtek (ILC-k) szortol\u00e1sa v\u00e9rb\u0151l. Az ILC-k nagyon ritka sejtek, eg\u00e9szs\u00e9ges \u00a0donorokperif\u00e9ri\u00e1s v\u00e9r\u00e9ben megk\u00f6zel\u00edt\u0151leg a limfocit\u00e1k 0,19\u2030-e ILC1, 0,16\u2030-e ILC2 \u00e9s 0,29\u2030-e ILC3. 5. Egysejt szortol\u00e1s 96 welles lemezre, CRISPR\/Cas9 rendszerben m\u00f3dos\u00edtott human choriocarcinoma (BeWo) sejtek kl\u00f3noz\u00e1sa c\u00e9lj\u00e1b\u00f3l. A Sony LE-SH800SFP sejtszorter eddig a v\u00e1rakoz\u00e1sainknak megfelel\u0151en m\u0171k\u00f6d\u00f6tt. Rem\u00e9lj\u00fck hogy hossz\u00fa t\u00e1von is megb\u00edzhat\u00f3 marad a k\u00e9sz\u00fcl\u00e9k.<\/p>\n<\/div>\n<\/div>\n

Tagok<\/h2>\n

Vezet\u0151<\/strong><\/p>\n

Dr. Buz\u00e1s Edit, egyetemi tan\u00e1r, az MTA doktora<\/p>\n

Tagok<\/strong><\/p>\n

    \n
  • Jo\u00f3n\u00e9 Baricza Eszter, tudom\u00e1nyos seg\u00e9dmunkat\u00e1rs<\/li>\n
  • Dr. Hegyesi Hargita, egyetemi docens<\/li>\n
  • Dr. P\u00e1llinger \u00c9va, egyetemi docens<\/li>\n
  • P\u00e1l\u00f3czi Krisztina, int\u00e9zeti m\u00e9rn\u00f6k<\/li>\n
  • Dr. Tam\u00e1si Viola, egyetemi docens<\/li>\n
  • Dr. Visnovitz Tam\u00e1s, tudom\u00e1nyos munkat\u00e1rs<\/li>\n<\/ul>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"

    Extracellul\u00e1ris vezikul\u00e1k szerepe a kardiovaszkul\u00e1ris megbeteged\u00e9sekben<\/p>\n","protected":false},"author":102560,"featured_media":0,"parent":149,"menu_order":0,"comment_status":"closed","ping_status":"closed","template":"","meta":{"_acf_changed":false,"footnotes":""},"categories":[],"tags":[],"class_list":["post-549","page","type-page","status-publish","hentry"],"acf":[],"_links":{"self":[{"href":"https:\/\/semmelweis.hu\/gsi\/wp-json\/wp\/v2\/pages\/549","targetHints":{"allow":["GET"]}}],"collection":[{"href":"https:\/\/semmelweis.hu\/gsi\/wp-json\/wp\/v2\/pages"}],"about":[{"href":"https:\/\/semmelweis.hu\/gsi\/wp-json\/wp\/v2\/types\/page"}],"author":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/semmelweis.hu\/gsi\/wp-json\/wp\/v2\/users\/102560"}],"replies":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/semmelweis.hu\/gsi\/wp-json\/wp\/v2\/comments?post=549"}],"version-history":[{"count":10,"href":"https:\/\/semmelweis.hu\/gsi\/wp-json\/wp\/v2\/pages\/549\/revisions"}],"predecessor-version":[{"id":682,"href":"https:\/\/semmelweis.hu\/gsi\/wp-json\/wp\/v2\/pages\/549\/revisions\/682"}],"up":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/semmelweis.hu\/gsi\/wp-json\/wp\/v2\/pages\/149"}],"wp:attachment":[{"href":"https:\/\/semmelweis.hu\/gsi\/wp-json\/wp\/v2\/media?parent=549"}],"wp:term":[{"taxonomy":"category","embeddable":true,"href":"https:\/\/semmelweis.hu\/gsi\/wp-json\/wp\/v2\/categories?post=549"},{"taxonomy":"post_tag","embeddable":true,"href":"https:\/\/semmelweis.hu\/gsi\/wp-json\/wp\/v2\/tags?post=549"}],"curies":[{"name":"wp","href":"https:\/\/api.w.org\/{rel}","templated":true}]}}